فهرست جداول
عنوان صفحه
جدول ۳-۱- ترکیبات محیط HEPES buffered M199 73
جدول ۳-۲- ترکیبات محیط Bicarbonate buffered M199 73
جدول ۳-۳- ترکیبات محیطIVF medium “Fert. TALP” ۷۴
جدول ۳-۴- ترکیبات محیطRinsing medium “R. TALP” ۷۴
جدول ۳-۵- ترکیبات محیط Sperm medium “S. TALP” ۷۵
جدول ۳-۶- ترکیبات محیط H-SOF 75
جدول ۳-۷- ترکیبات محیطی IVC- SOF 76
جدول ۳-۸- Medium A 76
جدول ۳-۹- مواد شیمیایی و تجهیزات ۷۷
جدول ۴-۱- حضور آلدوسترون در محیط کشت در زمانIVM یا روز چهارم
کشت جنینی، در تکامل جنین حاصل از تخمک های منجمد-ذوب شده………………………………………………۸۳
جدول ۴-۲- حضور آلدوسترون در محیط کشت در زمانIVM یا روز چهارم
کشت جنینی، در تکامل جنین حاصل از تخمک های تازه ۸۶
جدول ۴-۳- حضور آلدوسترون در محیط کشت در زمانIVM یا روز چهارم
کشت جنینی و تأثیر آن بر تعدا سلول های در تعدادی از سلولهای بلاستوسیست در تقسیم جنینهای حاصل از تخمکهای تازه ۸۶
فهرست نمودارها
عنوان صفحه
نمودار ۴-۱- تاثیر آلدسترون روی بیان زیرواحد های α۱ و β۱ پمپ ATPase سدیم
و پتاسیم در مدت IVM یا IVC – روز چهارم- در محیط کشت سلولهای
بلاستوسیت. نوارها با حروف مختلف نشان دهنده تفاوت معنیدار میباشد ۸۷
فهرست اشکال
عنوان صفحه
شکل ۱-۱- روند انجام اووژنزیزیس و اسپرماتوژنزیس ۱۰
شکل ۱-۲- روند انجام لقاح از زمان رشد تخمک ۱۱
شکل ۱-۳- تصاویر شماتیک مراحل نفوذ اسپرم به داخل تخمک ۲۱
شکل ۱- ۴- تصویر شماتیک روند تکامل جنین ۲۴
شکل ۱-۵- دو مکانیسم عملکرد مولکولی آلدوسترون ۳۸
شکل ۱- ۶- سیگنال های آلدوسترون ۳۹
شکل ۱-۷- میزان اتصال سلول – سلول در توده سلولی رویان ۴۴
شکل ۲-۱- اتصالات سلولی در رویان در حال تقسیم ونقش آنها در تشکیل حفره
بلاستوسل و تعیین موقعیت سلولهای ترفکتودرم و توده داخلی ۵۰
شکل۲-۲- فرایند تشکیل حفره بلاستوسل ۵۱
شکل۲-۳- ساز وکار کنترل فرایند هچ شدن بلاستوسیست ۵۳
شکل ۲-۴- پدیدۀ فعال شدن ژنوم رویانی ۵۶
شکل ۳-۱- رنگ آمیزی افتراقی بلاستوسیت های مشتق از تخمک های منجمد ۶۹
شکل ۳-۲- رنگ آمیزی ایمونوسیتوشیمی زیر واحد های α۱ و β۱ پمپ Na+/K+ ATPase 72
شکل ۴-۱- تصاویر مورولا و بلاستوسیست تولید شده در آزمایشگاه
جنین شناسی پژوهشگاه ابن سینا ۸۴
شکل ۴-۲- تصاویر بلاستوسیست های در حال تفریخ در آزمایشگاه
جنین شناسی پژوهشگاه ابن سینا ۸۴
چکیده
هدف: هدف از این مطالعه بررسی تآثیر آلدوسترون در افزایش توانمندی تکاملی تخمک های منجمد شده گوسفند با افزودن آلدوسترون در مرحله بلوغ تخمک و مرحله کشت جنینی می باشد.
مواد و روش ها: تخمک های حاصل از تخمدان های کشتارگاهی، بطور تصادفی به شش گروه آزمایشی تقسیم شدند: گروه های یک و دو: بلوغ تخمک های (IVM) منجمد شده و تازه در حضور آلدسترون و متعاقباً لقاح آزمایشگاهی تخمک ها (IVF) و کشت جنین های حاصله (IVC) (به ترتیب گروه هایVit-IVM و IVM). گروه های سه و چهار: IVM و IVF تخمک های منجمد شده و تازه، و متعاقباً IVC جنین های حاصله در حضور آلدوسترون در روز چهارم (D4) کشت جنینی (به ترتیب گروه های Vit-D4 و D4). گروه های پنجم و ششم: IVM، IVF و IVC تخمک های منجمد شده ( Vit-Cont) و تازه (Fresh-Cont) بدون حضور آلدوسترون. جنین ها در مراحل مورولا و بلاستوسیت، توسط آنتی بادی های اولیه بر علیه زیر واحدهایα_۱ و β_۱ پمپ Na⁺/K⁺/ATPase رنگ آمیزی ایمونوسیتوشیمی شدند.
نتایج: میزان تفریخ در گروه هایی که در IVM و یا IVC آنها آلدوسترون افزوده شده بود، در هر دو گروه تخمک های منجمد شده و تازه (به ترتیب گروه های Vit-IVM، IVM، Vit-D4 و D4) در مقایسه با گروه های کنترل (به ترتیب Vit-Cont. و Fresh-Cont.) به طور معنی داری بیشتر بود. میزان بیان تحت واحد β_۱ پمپ Na⁺/K⁺/ATPase، در گروه های Vit-D4 و D4 به طور معنی داری بیشتر از سایر گروه های بود. همچنین نسبت ICM/Total نیز به طور معنی داری در گروه IVM بیشتر از سایر گروه ها بود.
بحث: به طور خلاصه، اضافه نمودن آلدسترون به محیط های کشت IVM و IVC می تواند موجب افزایش معنی دار میزان تفریخ در هر دو گروه تخمک های منجمد شده و تازه گردد. این افزایش میزان تفریخ ممکن است با میزان بیان بیشتر زیر واحد β_۱ پمپ Na⁺/K⁺/ATPase، که احتمالاً توسط افزودن آلدوسترون به محیط کشت القا گردیده است، در ارتباط باشد.
کلید واژه: آلدوسترون، گوسفند، جنین، تکامل، Na⁺/K⁺/ATPase، بیان
مقدمه و معرفی طرح
در سالهای اخیرعلل مختلفی از قبیل بالا رفتن سن ازدواج، تعییر شیوه زندگی، عوامل عفونی و شیمیایی، اشعه و شیمی درمانی، مسائل ژنتیکی و یائسگی زود رس منجر به ناباروری زوجهای بسیاری شده و لذا انجماد و نگهداری تخمک اقدام اساسی در حفظ قدرت باروری و درمان ناباروری به شمار میرود. با توجه به ضرورت حفظ و نگهداری تخمک در روش های کمک باروری^[۱](ART) تلاشهای زیادی جهت انجماد و نگهداری تخمکها صورت گرفته است، لیکن تاکنون روش قابل اعتمادی در انجماد تخمک که بتواند میزان بالایی از زنده مانی تخمکها را نشان دهد گزارش نشده است. علی رغم بررسی های متعدد صورت گرفته بر روی تغییرات مورفولوژیک، فراساختاری، فیزیولوژیک و عملکردی تخمک های منجمد- ذوب شده، هنوز اطلاعات اندکی در خصوص وقوع تغییرات ملکولی و بیوشیمیایی ایجاد شده در تخمک های مذکور و نیز الگوی بیان پروتیین های مرتبط با توان تکاملی تخمک ها پس از لقاح، به چشم می خورد. با توجه به مطرح بودن این گونه حیوانی به عنوان حیوان مدل انسان برای مطالعات تخمدان و تخمک، خطر انقراض برخی از نژادهای این گونه جانوری، اهمیت این گونه حیوانی از نظر اقتصادی (فراورده های دامی)، نقش آن به عنوان بیوراکتور در مطالعات مرتبط با تولید حیوان تراریخته و نیز عدم انجام مطالعه ای در خصوص بررسی ارتباط بین تجویز آلدوسترون و وضعیت بیان آنزیم Na⁺/K⁺/ATPase در روند تشکیل بلاستوسیست، در مطالعه حاضر به بررسی تاثیرآلدوسترون در بهبود کیفی تخمک های منجمد شده پرداخته خواهد شد.

بدین منظور تخمک های استحصال شده از تخمدان های کشتارگاهی گوسفند، در مرحله GV از تقسیمات میوزی به روش کرایوتاپ و با بهره گرفتن از روش انجماد شیشه ای منجمد و پس از گذشت یک هفته ذوب شده و پس از لقاح، مراحل تکاملی آنها در شرایط آزمایشگاهی مورد بررسی قرار می گیرد.
فصل اول
کلیات