۸
۹
۱۰

پس از بررسی‌های لازم، مقدار روغن شترمرغ و ترشح حلزون بکار رفته در فرمولاسیون، انتخاب شد. سپس فرمولاسیون مطلوب پس از رسیدن به تعادل (۴۸ ساعت پس از ساخت)، مورد آزمایش‌های کنترل قرار گرفت.
۳-۷. بررسی‌های فیزیکی و شیمیایی
۳-۷-۱. بررسی یکنواختی
۵/۰ گرم از نمونه‌های ساخته شده روی لام تمیزی گسترده شد و پس از قرار دادن لام تمیز روی آن، با میکروسکوپ نوری با بزرگنمایی ۱۰ و ۴۰ یکنواختی آن بررسی شد. (۲۱)
۳-۷-۲.آزمایش سیکل حرارتی
نمونه به مدت ۴۸ ساعت در دمای ۵ درجه سانتی‌گراد (یخچال) و ۴۸ ساعت در دمای ۲۵ درجه سانتی‌گراد (دمای معمولی آزمایشگاه) قرار داده شد. این عمل شش مرتبه تکرار و سپس کیفیت ظاهری فرآورده بررسی شد. (۳۳)
۳-۷-۳. آزمایش تغییرات دما
۳ نمونه ۲۰ گرمی از فرآورده و پایه به تعادل رسیده، تهیه شد و یک نمونه در دمای ۴ تا ۶ درجه سانتی‌گراد (دمای یخچال) و یک نمونه در دمای ۲۵ درجه سانتی‌گراد (دمای اتاق) و یک نمونه در دمای ۴۵ تا ۵۰ درجه سانتی‌گراد (درون آون) قرار گرفت و پس از ۲۴ ساعت، یک ماه و سه ماه کیفیت نمونه‌ها بررسی شد. (۳۳)
۳-۷-۴. آزمایش سرد و گرم شدن
یک نمونه ۲۰ گرمی از فرآورده و پایه به تعادل رسیده در ۶ دوره متوالی هر یک ۴۸ ساعت در دمای ۴۵ تا ۵۰ درجه سانتی‌گراد و سپس ۴۸ ساعت در دمای ۴ درجه سانتی‌گراد تحت تاثیر تغییرات دما قرار گرفتند و سپس، نمونه‌ها از نظر کیفیت ظاهری بررسی شدند. (۳۳)
۳-۷-۵. تعیین pH فرآورده
pH فرآورده و پایه در فواصل زمانی ۴۸ ساعت، یک هفته، یک ماه و سه ماه پس از ساخت در شرایط ذکر شده اندازه‌گیری شد. آزمایش سه بار تکرار گردید. (۳۳)
۳-۷-۶. کنترل میکروبی نمونه‌ها
این آزمون مطابق فارماکوپه vsp بر روی کرم پایه شماره ۳ و ۹ انجام گرفت و از لحاظ وجود میکروارگانیسم‌های پاتوژن و شمارش کلی میکروارگانیسم‌های هوازی طبق مراحل زیر مورد بررسی قرار گرفت. (۸)
تهیه سوسپانسیون میکروبی
ابتدا هر یک از میکروارگانیسم‌های فعال شده استافیلوکوک اورئوس، سودوموناآئروژزینوزا، ‌سالمونلا و اشریشیاکلی، ‌بر روی پلیت حاوی محیط مغزی SCDB^[3] (بوی بین کاذئین دایجست آگار) کشت داده شد.
همچنین میکروارگانیسم فعال شده کاندیدا آلبیکنس نیز بر محیط کشت SDA^[4] (سایر و دکستروز آگار) کشت داده شد. سپس پلیت‌های حاوی باکتری‌ها در گرمخانه ۳۵-۳۰ درجه سانتیگراد و پلیت حاوی کاندیدا آلبیکنس در گرمخانه ۲۵-۲۰ درجه سانتیگراد قرار داده شدند.
بعد از طی زمان گرمخانه‌گذاری به پلیت‌های مورد نظر چند گلوله شیشه‌ای استریل و ۹ میلی‌لیتر محلول کلرید سدیم ۹/۰ درصد استریل اضافه کرده، تکان داده شد تا میکروارگانیسم‌ها از محیط موجود در روی سطح پلیت جدا و به صورت سوسپانسیون در آیند. سپس سوسپانسیون‌های میکروبی تهیه شده به لوله‌های سرپیچ‌دار منتقل شدند.
تهیه رقت‌های میکروبی
از سوسپانسیون‌های میکروبی حاصل ۱ میلی‌لیتر به یک ارلن ۱۰۰ میلی‌لیتر اضافه کرده و با بافر فسفات با pH معادل با ۲/۷، حجم آنها به ۱۰۰ میلی‌لیتر رسانده شدند. سپس ده میلی‌لیتر از آن را به ارلن دیگر منتقل کرده به حجم صد میلی‌لیتر رسانده شدند. به این ترتیب تمام میکروارگانیسم‌ها با رقت  تهیه شدند.
آزمایشات مقدماتی
این آزمایشات به منظور عدم وجود فاکتورهای مهار کننده رشد میکروارگانیسم‌ها روی کرم مورد آزمایش انجام شد. به این ترتیب که ابتدا رقت ۱۰: ۱ از کرم منتخب با بهره گرفتن از محیط کشت SCDB (سری بین کاذئین دایجست براث) در یک لوله آزمایش تهیه شد و سپس رقت ۱۰: ۱ از کرم منتخب با بهره گرفتن از محیط کشت SDB (سابرودکسترو براث) در لوله آزمایش دیگری تهیه شد. سپس مقادیر یک میلی‌لیتر از سوسپانسیون‌های میکروبی دقیق شده به هر یک از لوله‌های آزمایش اضافه شد و در لوله‌ها با فویل کامل پوشیده شد. سپس لوله‌ها در محیط گرمخانه‌ای ۳۵-۳۰ درجه سانتی‌گراد برای باکتری‌ها و ۲۵-۲۰ درجه سانتی‌گراد برای کاندیدا آلبیکنس قرار داده شد. در فواصل ۲۴ و ۴۸ ساعت رشد میکروارگانیسم‌ها با بردن یک لوپ از سوسپانسیون فوق به محیط کشت افتراقی مورد بررسی قرار گرفت و در نهایت در لوله آزمایش و رشد میکروارگانیسم‌ها دیده شد.

جستجو و تشخیص میکروارگانیسم‌های پاتوژن
برای جستجو و تشخیص میکروارگانیسم‌های پاتوژن برحسب استاندارد مورد نظر باید توجه داشت که عدم وجود میکروارگانیسم‌ها در چه مقدار از فرآورده باید مورد بررسی قرار گیرد.
مثلاً در vsp عدم وجود میکروارگانیسم‌‌ها در ۱۰ گرم یا ۱۰ میلی‌لیتر از فرآورده خواسته شده است. حجم انتخاب شده باید متناسب با مقدار نمونه باشد تا مواد مغذی موجود در محیط به طور قابل ملاحظه‌ای رقیق نشده باشد و ارگانیسم‌ها در شرایط مساعد برای رشد قرار گرفته باشند. به طور معمول محیط نباید بیشتر از ۱۰ در ۱۰۰ رقیق گردد. در این آزمون در صورتی که ارگانیسم‌های پاتوژن حتی با تعداد کم در نمونه موجود باشند قادر به تکثیر بوده و با بهره گرفتن از محیط‌های انتخابی آنها را از سایر میکروارگانیسم‌های همراه جدا و شناسایی شد.
برای این منظور از محیط SCDB جهت بررسی رشد استاف طلایی و سودوموناآئروژینوزا از محیط LB (لاکتوز براث) برای بررسی رشد اشریشیاکلی و سالمونلا و از محیط کشت SDB (سابرودکستروز براث) برای رشد کاندیدا آلبیکنس استفاده شد.
طبق آزمایشات مقدماتی محلول رقیق شده ۱۰: ۱ از نمونه در محیط کشت تهیه شد. به این ترتیب که ۱۰۰ میلی‌لیتر از هر یک از محیط کشت SCDB، LB، SDB تهیه کرده و ۱۰ گرم از فرآورده به هر یک از این سه محیط کشت اضافه شد محیط کشت SCDB و LB را در گرمخانه ۳۵-۳۰ درجه سانتی‌گراد و محیط کشت SDB را در گرمخانه ۲۵-۲۰ درجه سانتی‌گراد قرار داده شد. سپس در روز اول و دوم و سوم از ارلن‌های SCDB (برای تشخیص سودومونا و استاف) و LB (برای شخص سولمونلا و اشریشیاکلی) با لوپ نمونه‌برداری کرده و بر روی محیط‌های SCDA و محیط‌های اختصاص هر یک از میکروارگانیسم‌های پاتوژن کشت داده شد. در مورد کاندیدا نمونه‌برداری در روز اول، ‌دوم، ‌سوم، هفتم و چهاردهم انجام شد و از نمونه بر روی محیط کشت اختصاصی SDA کشت داده شد.
فصل چهارم
نتایج
۴-۱. نتایج استخراج چربی
چربی‌های بدست آمده با روش استخراج گداخت مرطوب پس از متیله شدن به دستگاه GC/ MASS تزریق شد نتایج حاصل به شرح زیر است:
۴-۱-۱. نتایج مربوط به آنالیز مقایسه‌ای نمونه مجهول بدست آمده از روغن شترمرغ طیف جرمی بوسیله دستگاه GC/MASS
در ترکیب مجهول پیک‌هایی در ۱۵، ۲۹، ۴۱، ۵۵، ۵۹، ۶۹، ۸۳، ۹۶، ۱۱۰، ۱۲۳، ۱۳۸، ۱۵۲، ۱۷۰، ۱۹۴، ۲۰۷، ۲۱۸، ۲۳۶، ۲۵۰، ۲۶۸ دیده می‌شود. با مقایسه این پیک‌ها با ترکیبات استاندارد که طیف جرمی آنها ثبت شده است تشابه زیادی بین پیک‌های موجود در روغن شترمرغ و ترکیب ۹- Hexadecenoic acid (پالمیتولئیک اسید) دیده می‌شود برای مثال پیک‌های ۴۱، ۵۵، ۶۹، ۸۳، ۹۶، ۱۱۰، ۱۲۳، ۱۳۸، ۱۵۲، ۱۶۵، ۱۹۴، ۲۰۷، ۲۱۸، ۲۳۶، ۲۶۸ در هر دو نمونه استاندارد و مجهول دیده می‌شود.
نمودار ۴-۱. وجود ۹- هگزادکانوئیک اسید متیل استر بوسیله دستگاه تأیید شده است.
۴-۱-۲. نتایج مربوط به آنالیز مقایسه‌ای نمونه مجهول بدست آمده از روغن شترمرغ طیف جرمی بوسیله دستگاه GC/MASS
در ترکیب مجهول پیک‌هایی در ۱۵، ۲۹، ۴۳، ۵۵، ۵۹، ۷۴، ۸۳، ۸۷، ۹۷، ۱۱۵، ۱۲۹، ۱۴۳، ۱۵۷، ۱۷۱، ۱۸۵، ۱۹۹، ۲۱۳، ۲۲۷، ۲۳۹، ۲۷۰ دیده می‌شود. با مقایسه این پیک‌ها با ترکیبات استاندارد که طیف جرمی آنها ثبت شده است تشابه زیادی بین پیک‌های موجود در روغن شترمرغ و ترکیبHexadecenoic acid (پالمتیک اسید) دیده می‌شود برای مثال پیک‌های ۳۰، ۴۳، ۵۵، ۷۴، ۸۷، ۹۷، ۱۱۵، ۱۲۹، ۱۴۳، ۱۵۷، ۱۷۱، ۱۸۵، ۱۹۹، ۲۱۳،۲۲۷، ۲۳۹، ۲۷۰، ۲۸۱، ۳۵۵در هر دو نمونه استاندارد و